人干擾素調(diào)節(jié)因子可與干擾素基因中順式元件結(jié)合,調(diào)控干擾素及干擾素激活基因(ISG)的表達(dá)。因此,干擾素調(diào)節(jié)因子在機(jī)體抗病毒感染、調(diào)控細(xì)胞生長等方面有重要意義。
應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）水平。用純化的人干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1），再與HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）濃度。
使用人干擾素調(diào)節(jié)因子的注意事項(xiàng)如下：
1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好，不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6、洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7、底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。
8、加入試劑的順序應(yīng)一樣，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9、按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
